高效液相色譜常見問題及處理方法包含：柱壓，漏液，譜圖問題等，凱米斯科技為您提供完善解決方案。

一、柱壓

(一)柱壓過高

 柱壓過高是HPLC柱用戶最常碰到的問題。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的問題，您可按下面步驟檢查問題的起因。

1、拆去保護(hù)預(yù)柱，看柱壓是否還高，否則是保護(hù)柱的問題，若柱壓仍高，再檢查；

2、把YMC色譜柱從儀器上取下，看壓力是否下降，否則是管路堵塞，需清洗，若壓力下降，再檢查；

3、將柱子的進(jìn)出口反過來接在儀器上，用10倍柱體積的流動(dòng)相沖洗柱子，（此時(shí)不要連接檢測器，以防固體顆粒進(jìn)入流動(dòng)池）。這時(shí)，如果柱壓仍不下降，再檢查；

4、更換柱子入口篩板，若柱壓下降，說明您的溶劑或樣品結(jié)晶沉淀或含有顆粒雜質(zhì)，正是這些雜質(zhì)將篩板堵塞引起壓力上升。若柱壓還高，請與廠商聯(lián)系。一般情況下，在進(jìn)樣器與保護(hù)柱之間接一個(gè)在線過濾器便可避免柱壓過高的問題。

5、進(jìn)樣閥損壞：清洗或更換進(jìn)樣閥。

6、柱溫過低：提高溫度。

7、在線過濾器阻塞：清洗或更換在線過濾器。

8、流速設(shè)定過高：降低流速

9、壓力傳感器故障：更換壓力傳感器。

（二）柱壓過低

1、漏液：確定漏液位置并維修。

2、壓力傳感器損壞：更換壓力傳感器。

3、泵頭內(nèi)有空氣：溶劑脫氣、啟動(dòng)泵抽出空氣。

4、流速設(shè)定過低：調(diào)整流速。

5、柱溫過高：降低溫度。

（三）壓力波動(dòng)

1、流動(dòng)相有溶解氣體；用超聲波脫氣15-30分鐘或用充氦氣脫氣

2、單向閥堵塞；取下單向閥，用超聲波在純水中超20分鐘左右，去處堵塞物

3、.泵密封損壞，造成壓力波動(dòng)；更換泵密封

4、.系統(tǒng)存在漏液點(diǎn)；確定漏液位置并維修

5、柱后產(chǎn)生氣泡；流通池出液口加負(fù)壓調(diào)整器

6、使用梯度洗脫：由于流動(dòng)相粘度的變化引起的壓力波動(dòng)。

二、漏液

（一）接頭處漏液

1、接頭沒有擰緊；擰松后再緊，手緊接頭以手勁為限，不要使用工具，不銹鋼接頭先用手?jǐn)Q緊，再用專用扳手緊1/4-1/2圈，注意接頭中的管路一定要通到底，否則會留下死體積。

2、接頭被污染或磨損；建議更換接頭。

3、接頭不匹配，建議使用同一品牌的配件。

（二）泵漏液

1、單向閥松動(dòng)：擰緊或更換單向閥。

2、接頭松動(dòng)：擰緊接頭。

3、混合器密封損壞：更換混合器密封或更換混合器。

4、泵密封損壞：維修或更換泵密封件。

5、壓力傳感器損壞：維修或更換壓力傳感器。

6、脈沖阻尼器損壞：更換脈沖阻尼器。

7、比例閥損壞：檢查隔膜和手緊接頭，如果漏液立即更換。

8、放空閥損壞：擰緊放空閥，如果損壞，更換放空閥。

（三）進(jìn)樣閥漏液

1、.轉(zhuǎn)子密封損壞；更換轉(zhuǎn)子密封。

2、.定量環(huán)阻塞；清洗或更換定量環(huán)。

3、進(jìn)樣口密封松動(dòng)；調(diào)整松緊度。

4、.進(jìn)樣針頭尺寸不合適，一般是過短；使用恰當(dāng)?shù)倪M(jìn)樣針（注意針頭形狀）。

5、廢液管中產(chǎn)生虹吸；清空廢液管。

6、廢液管阻塞：更換或疏通廢液管。

（四）高效液相色譜柱漏液

1、尾端接頭松動(dòng)：擰緊接頭。

2、卡套內(nèi)有填料：拆下、清洗卡套、重新安裝。

3、篩板厚度不合適：使用合適的篩板。

（五）檢測器漏液

1、流通池墊片損壞：避免過大的背景壓力，更換墊片

2、流通池窗破碎：更換窗口。

3、手緊接頭漏液：擰緊或更換。

4、廢液管阻塞：更換廢液管。

5、流通池阻塞：更換。

三、譜圖問題

（一）峰拖尾

1、篩板阻塞：反沖色譜柱、更換進(jìn)口篩板。

2、色譜柱塌陷：填充色譜柱。

3、.有干擾物質(zhì)的存在：使用更長的色譜柱、改變流動(dòng)相或更換色譜柱。

4、流動(dòng)相PH值不合適：調(diào)整PH值，對于堿性化合物，低PH值更有利于得到對稱峰。

5、樣品與填料表面的活性點(diǎn)發(fā)生反應(yīng)：加入離子對試劑，比如流動(dòng)相中有銨鹽的時(shí)適當(dāng)加大銨鹽的含量；加入堿性揮發(fā)性修飾劑，比如三乙胺然后用酸調(diào)節(jié)至原來的PH（建議用非揮發(fā)性的磷酸）。

6、流動(dòng)相中加入適當(dāng)?shù)乃臍溥秽ǔ＜尤肓吭?%以內(nèi)即可。

7、酸性或堿性化合物的峰拖尾：使用濃度50-100mM的緩沖液；使用流動(dòng)相PH等于PKa的緩沖液。
8、樣品過載：降低進(jìn)樣量。

（二）峰前延

1、柱溫低：升高柱溫，最好不要超過40℃。

2、樣品溶劑選擇不當(dāng)：使用流動(dòng)相作為樣品溶劑。

3、樣品過載：降低樣品含量。

4、色譜柱損壞：更換色譜柱。

5、流動(dòng)相中緩沖鹽濃度不足：增加緩沖鹽濃度可以增加離子強(qiáng)度，減少因靜電的作用引起的前拖。

6、流動(dòng)相中加入適當(dāng)?shù)乃臍溥秽ǔ＜尤肓吭?%以內(nèi)即可。

（三）峰分叉

1、保護(hù)柱或分析柱污染：取下保護(hù)柱再進(jìn)行分析。如果必要更換保護(hù)柱。如果分析柱阻塞，拆下來清洗。如果問題仍然存在，可能是柱子被強(qiáng)保留物質(zhì)污染，運(yùn)用適當(dāng)?shù)脑偕胧Ｈ绻麊栴}仍然存在，入口可能被阻塞，更換篩板或更換色譜柱。

2、樣品溶劑不溶于流動(dòng)相：改變樣品溶劑，如果可能，用流動(dòng)相作為溶劑。

（四）大峰變形

樣品過載：減少到合適的進(jìn)樣量。

（五）早出的峰變形

1、進(jìn)樣量不正確：減少進(jìn)樣量。

2、樣品溶劑選擇不當(dāng)：用流動(dòng)相做溶劑或者使用更弱的溶劑。

（六）早出的峰拖尾程度大于晚出的峰

柱外效應(yīng)：使用更短、內(nèi)徑更小的管路；使用小體積的流通池。

（七）K’增加時(shí)，拖尾更嚴(yán)重

1.反相模式，二級保留效應(yīng):.加入三乙胺（堿性樣品）；加入乙酸（酸性樣品） ；加入鹽或緩沖劑（離子樣品）；更換一根柱子。

2、正湘模式，二級保留效應(yīng)：加入三乙胺（堿性樣品）；加入乙酸（酸性樣品） ；加入水；

3、離子對，二級保留效應(yīng)：加入三乙胺（堿性樣品）。

（八）額外的峰
1、前一次進(jìn)樣的洗脫峰：提高流速；增加運(yùn)行時(shí)間或梯度斜率。

2、倒峰或鬼峰：檢查流動(dòng)相是否純凈；使用流動(dòng)相作為溶劑；減少進(jìn)樣體積。

（九）保留時(shí)間波動(dòng)及突然變化

1、溫控不當(dāng)；調(diào)節(jié)好柱溫。

2、流動(dòng)相組分變化；防止流動(dòng)相蒸發(fā)、反應(yīng)等，做梯度時(shí)尤其要注意流動(dòng)相混合的均勻

3、色譜柱沒有平衡；在每一次運(yùn)行之前給予足夠的時(shí)間平衡色譜柱。

4、流速變化：重新設(shè)定流速。

5、泵中有氣泡：從泵中除去氣泡。

6、流動(dòng)相選擇不當(dāng)：更換合適的流動(dòng)相。

（十）基線漂移

1、柱溫波動(dòng)：控制好柱子和流動(dòng)相的溫度。

2、流動(dòng)相不均勻：使用HPLC級的溶劑，高純度的鹽和添加劑，流動(dòng)相在使用前進(jìn)行脫氣。

3、檢測器內(nèi)流通池被污染或有氣體：用甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑沖洗流通池

4、檢測器出口阻塞：去除阻塞物或更換管子。

5、流動(dòng)相配比不當(dāng)或流速變化：更改配比或流速。

6、樣品中有強(qiáng)保留的物質(zhì)（高K’值）以饅頭峰樣被洗脫出，從而表現(xiàn)出一個(gè)逐步升高的基線：使用保護(hù)住，如有必要，在進(jìn)樣之間或在分析過程中，定期用強(qiáng)溶劑沖洗柱子。

7、檢測器沒有設(shè)定在最大吸收波長處：將波長調(diào)整至最大吸收波長處。

（十一）分離度降低

1、流動(dòng)相污染或變質(zhì)（引起保留時(shí)間的變化）：重新配置流動(dòng)相。

2、保護(hù)柱或分析柱阻塞：取下保護(hù)住再分析，也可更換保護(hù)住，若是分析柱堵，拆下來清洗，如果問題仍然存在，可能是柱子被強(qiáng)保留物污染，也可能是入口處堵，可以更換篩板或色譜柱。

上一篇: 聯(lián)系我們

下一篇: 什么是HPLC?