高效液相色譜HPLC應(yīng)用主要分為：樣品測定與方法研究，本文從這兩方面著重介紹HPLC的應(yīng)用。

高效液相色譜HPLC應(yīng)用主要分為：樣品測定與方法研究，本文從這兩方面著重介紹HPLC的應(yīng)用。

一、樣品測定

1．流動相比例調(diào)整：由于我國藥品標(biāo)準中沒有規(guī)定柱的長度及填料的粒度，因此每次新開檢新品種時幾乎都須調(diào)整流動相（按經(jīng)驗，主峰一般應(yīng)調(diào)至保留時間為6~15分鐘為宜）。所以建議第一次檢驗時請少配流動相，以免浪費。弱電解質(zhì)的流動相其重現(xiàn)性更不容易達到，請注意充分平衡柱。

2．樣品配制：①溶劑；②容器：塑料容器常含有高沸點的增塑劑，可能釋放到樣品液中造成污染，而且還會吸留某些藥物，引起分析誤差。某些藥物特別是堿性藥物會被玻璃容器表面吸附，影響樣品中藥物的定量回收，因此必要時應(yīng)將玻璃容器進行硅烷化處理。

3．記錄時間：第一次測定時，應(yīng)先將空白溶劑、對照品溶液及供試品溶液各進一針，并盡量收集較長時間的圖譜（如30分鐘以上），以便確定樣品中被分析組分峰的位置、分離度、理論板數(shù)及是否還有雜質(zhì)峰在較長時間內(nèi)才洗脫出來，確定是否會影響主峰的測定。

4．進樣量：藥品標(biāo)準中常標(biāo)明注入10ml，而目前多數(shù)HPLC系統(tǒng)采用定量環(huán)（10ml、20ml和50ml），因此應(yīng)注意進樣量是否一致。（可改變樣液濃度）

5．計算：由于有些對照品標(biāo)示含量的方式與樣品標(biāo)示量不同，有些是復(fù)合鹽、有些含水量不同、有些是鹽基不同或有些是采用有效部位標(biāo)示，檢驗時請注意。

6．儀器的使用：

①流動相濾過后，注意觀察有無肉眼能看到的微粒、纖維。有請重新濾過。

②柱在線時，增加流速應(yīng)以0.1ml/min的增量逐步進行，一般不超過1ml/min，反之亦然。否則會使柱床下塌，叉峰。柱不線時，要加快流速也需以每次0.5ml/min的速率遞增上去（或下來），勿急升（降），以免泵損壞。

③安裝柱時，請注意流向，接口處不要留有空隙。

④樣品液請注意濾過（注射液可不需濾過）后進樣，注意樣品溶劑的揮發(fā)性。

⑤測定完畢請用水沖柱1小時，甲醇30分鐘。如果第二天仍使用，可用水以低流速（0.1~0.3ml/min）沖洗過夜（注意水要夠量），不須沖洗甲醇。另外需要特別注意的是：對于含碳量高、封尾充分的柱，應(yīng)先用含5~10%甲醇的水沖洗，再用甲醇沖洗。

⑥沖水的同時請用水充分沖洗柱頭（如有自動清洗裝置系統(tǒng)，則應(yīng)更換水）。

二、方法研究

1．波長選擇：首先在可見紫外分光光度計上測量樣品液的吸收光譜，以選擇合適的測量波長，如最靈敏的測量波長并避開其它物質(zhì)的干擾。從紫外光譜中還可大體知道在HPLC中的響應(yīng)值，如吸收度小于0.5時，HPLC測定的面積將會很小。

2．流動相選擇：盡量采用不是弱電解質(zhì)的甲醇-水流動相。

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